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MTT細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測試劑盒

MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit

產(chǎn)品貨號：JY02021    規(guī)格：500 T   銷售價格：￥200

產(chǎn)品組分：MTT粉末 25 mg +MTT溶劑 5 mL +甲臜溶解液 55 mL

MTT細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測試劑盒 說明書.pdf

產(chǎn)品簡介

MTT全稱為3-(4,5-Dimethyl-2-Thiazolyl)-2,5-Diphenyl Tetrazolium Bromide，（Thiazolyl Blue Tetrazolium Bromide），中文名簡稱：噻唑藍(lán)。CAS號298-93-1，分子式為C₁₈H₁₆BrN₅S，分子量為414.32。

MTT細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測試劑盒（MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit）是一種非常經(jīng)典的細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性檢測試劑盒，被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的檢測。其檢測原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲臜（Formazan）并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無此功能。二甲基亞砜（DMSO）或特定的甲臜溶解液能溶解細(xì)胞中的甲臜，用酶標(biāo)儀在570 nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。細(xì)胞增殖越多越快，則吸光度越高；細(xì)胞毒性越大，則吸光度越低。該方法已廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細(xì)胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等。本試劑盒本底低，靈敏度高，線性范圍寬，使用方便。

本公司提供兩種MTT檢測試劑盒：JY02021 MTT細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測試劑盒和JY02022 MTT檢測試劑盒。傳統(tǒng)MTT檢測方法中，由于產(chǎn)生的甲臜是不溶于水的，需要先將上層反應(yīng)液移除，再加入DMSO溶解甲臜，此步操作容易吸走甲臜造成實驗誤差，且增加了懸浮細(xì)胞實驗的困難。“JY02021 MTT細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測試劑盒”采用了獨特的甲臜溶解液配方，無需去除原有的培養(yǎng)液，可以直接加入甲臜溶解液溶解甲臜，從而避免了由于去除培養(yǎng)液時甲臜被部分去除而引起的誤差，且懸浮細(xì)胞更適用。而“JY02022 MTT檢測試劑盒”保留了DMSO溶解甲臜的策略，但顯著縮短了甲臜溶解時間，從原來的數(shù)小時縮短為數(shù)分鐘，節(jié)約了實驗時間。

本公司還提供更優(yōu)的CCK-8試劑盒（JY02031），適用于貼壁和懸浮細(xì)胞的增殖和毒性檢測。

保存條件

冰袋運輸；未開封時4oC保存，1年有效。開封后，將MTT粉末配制成MTT溶液，需-20oC避光保存；甲臜溶解液4oC和室溫保存均可。

注意事項

1．使用96孔板進(jìn)行檢測，若細(xì)胞培養(yǎng)時間較長，需注意孔板外圈培養(yǎng)液蒸發(fā)?？梢詶売猛馊Π蹇?，改加PBS，水或培養(yǎng)液并將孔板置于靠近培養(yǎng)箱內(nèi)水源的地方，以緩解培養(yǎng)液蒸發(fā)。

2．MTT配制成溶液后為黃色，需避光保存，長時間光照會導(dǎo)致失效。當(dāng)顏色變?yōu)榛揖G色時，請勿使用。

3．甲臜溶解液低溫保存可能會產(chǎn)生沉淀，只需 37℃水浴使其充分溶解，混勻后即可使用。

4．加入甲臜溶解液后請適當(dāng)輕輕混勻，但須注意避免產(chǎn)生泡沫。

5．本產(chǎn)品僅用于科學(xué)研究，不得用于臨床診斷和治療，不得用于食品和藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。

6．為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用說明

A．MTT溶液的配制：

用5 mL MTT溶劑溶解25 mg MTT，配制成5 mg/mL的MTT溶液。配制后即可使用，或直接-20oC避光保存，也可以根據(jù)需要適當(dāng)分裝后-20oC避光保存。

B．MTT檢測（以96孔為例）：

1．收集對數(shù)期細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度，鋪于96孔板。貼壁細(xì)胞1000-10000/孔，懸浮細(xì)胞10000-100000/孔（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。按照實驗需要，進(jìn)行培養(yǎng)并給予藥物處理（含有藥物的培養(yǎng)基也為100 μL）。

注：● 96孔板四周的32個邊孔不要使用，建議加入滅菌PBS補齊。因邊孔水分蒸發(fā)快，培液會出現(xiàn)濃縮現(xiàn)象，細(xì)胞狀態(tài)處理條件等都不再準(zhǔn)確，通常將其稱為“邊緣效應(yīng)”。

● 實驗時應(yīng)設(shè)置調(diào)零孔，對照孔和加藥孔。調(diào)零孔加培養(yǎng)基、MTT、二甲基亞砜（無細(xì)胞的空白對照）。對照孔和加藥孔都要加細(xì)胞、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞砜，不同的是對照孔加溶解藥物的介質(zhì)，而加藥組加入不同濃度的藥物。每組設(shè)3-6個副孔。

2．可選：若因培養(yǎng)時間較長，培養(yǎng)液蒸發(fā)導(dǎo)致每孔液面差異較大，需更換新鮮培養(yǎng)基。短期無需此步。

對于貼壁細(xì)胞，去除舊的培養(yǎng)液，更換100 μL/孔新鮮的培養(yǎng)液；對于懸浮細(xì)胞，離心96孔板，去除盡可能多的上清液，然后加入100 μL/孔新鮮的培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。

3．每孔加入10 μL MTT溶液，適當(dāng)混勻，在細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育4 h。

4．每孔加入100 μL甲臜溶解液，適當(dāng)混勻，在細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)再繼續(xù)孵育。直至在普通光學(xué)顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)甲臜全部溶解。通常37oC孵育3-4 h左右，紫色結(jié)晶會全部溶解。如果紫色結(jié)晶較小較少，溶解時間會縮短。如果紫色結(jié)晶較大較多，溶解時間會延長，此時為加速溶解可以適當(dāng)振搖數(shù)次。

5．在570nm測定吸光度。如無570nm濾光片，可以使用560-600nm的濾光片。